土壤样本的采集

    分离肥料菌种是筛选的第*步，任务是获得多样化的不同种类的菌株，供进一步筛选之用。土壤是微生物生长发育的良好环境。所以，微生物肥料菌种主要是从土壤分离。由于土壤中有多种微生物，为了分离得到不同微生物，应选择培养基进行分离。

 菌株的分离与纯化    

    (1)稀释法

    称取采集的土壤样本l0g，置入装有小玻璃珠的l00mL无菌水的250mL三角瓶中，振荡20min，即制成10%的土壤悬浮液，放置30s后，用无菌吸管按每级稀释10倍的顺序制备系列的土壤稀释液。稀释液的稀释度是由土壤中的目的菌含量决定的。稀释度过大，造成出菌率过低；稀释度过小，会使分离的菌落过密，影响分离和纯化。所以应做预备试验，以确定适宜的稀释倍数。

    (2)弹土法   

    将风干土壤研细过筛后，取一定量的细土平铺于光滑圆硬纸板（大小约为培养皿的直径）上，再将多余的倒掉，使纸板上微微见有细土黏附。接种时将纸板的黏土面轻轻覆盖在培养基平板上，并用手指轻轻弹动一下立即取下，则有一层土壤微粒均匀地散落在平板上。取下的土样纸板仍可连续用于第二、第三和第四套培养皿，通过土壤量的递减，以达到控制理想的出菌率。

    (3)混土法

    先将2%左右的水琼脂15mL倒入培养皿制成平板，成为底层培养基，然后称取1～2mg研细的土样与20mL已融化的分离培养基混匀，吸取5mL，于已凝固的水琼脂平板上铺平，进行分离培养。